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ATP檢測方法

發布日期:2022-11-08 10:29 來源:http://www.singtellifelabs.com 點擊:

ATP檢測方法

三磷酸腺苷(Adenosine Tri-Phosphate, ATP)是自然界各種生命活動中共用的能量載體。無論是真核細胞還是原核細胞,都以ATP作為能量儲存和轉移的分子。ATP可作為細胞活性的一個標志物。具有代謝活性的細胞含有一定量的ATP,檢測ATP含量可作為培養細胞增殖和細胞毒性的定量指標;而在細胞發生凋亡或壞死時,其ATP含量會迅速下降。通過監測ATP含量的改變,可以評價多種藥物、生物制劑或生物活性物質引起的細胞殺傷、細胞抑制和細胞增殖作用。ATP也常作為微生物污染的一個指標,微生物繁殖引起食品、藥品等ATP含量的增高,可以被敏感地檢測到。

ATP檢測可以用成色反應、熒光、化學發光或同位素等方法實現。采用化學發光方法檢測ATP,具有更高的敏感性,并具有簡便、快速等特點,因此是目前更為流行的方法?;瘜W發光方法檢測ATP,是基于螢火蟲熒光素酶催化熒光素氧化,消耗ATP,發出光子的高效發光反應;該反應的發光效率極高,發光量與ATP含量有很好的線性關系。本公司生產的ATP檢測試劑盒,應用突變重組的螢火蟲熒光素酶,催化長時發光反應,專門測定ATP含量。

生物體內多種酶促反應以ATP為底物,消耗能量;ATP的高能磷酸鍵斷裂,形成ADP或AMP。多種具有重要生物功能的酶如激酶、ATP酶等產生ADP,通過檢測其酶促反應中ADP與ATP比值,可以間接監測酶促反應的進程。細胞在發生凋亡或壞死時,其ADP與ATP含量的變化特征不同,檢測細胞中ADP與ATP比值,也是區分細胞凋亡或壞死的一個間接指標。本公司生產的ATP/ADP檢測試劑盒,在測定ATP含量的基礎上,進一步將ADP轉化為ATP,采用相同的ATP測定方法,對ADP含量進行定量,從而得到ADP與ATP比值。單個樣品一體化的測定方法,給實驗工作帶來很大的便利。

1. 電泳法:根據核苷酸分子同時攜帶酸堿基團,在一定條件下,利用其在電場中的遷移速度不同而實現分離。

1) 紙電泳法: 將電場加在浸泡過緩沖液的濾紙上,使ATP與其他雜質分離,再利用比色法測定ATP的吸收值,計算其含量。此法是衛生部及地方采用的ATP標準檢測方法。

2) 凝膠電泳法:根據介質不同,可分為聚丙烯酰胺電泳法(PAGE),SDS-PAGE和瓊脂糖凝膠電泳法,前兩種方法常用于生物機制的研究。瓊脂糖凝膠電泳法是以瓊脂糖為介質,檸檬酸為緩沖液,利用電泳將ATP與雜質分離,實現ATP含量檢測。

3) 毛細管電泳法:以毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅動力,利用各組分間淌度和分配行為上的差異,實現ATP與雜質的分離。

2. 光學分析法:因其操作簡單、儀器要求低,常用于科研領域的ATP含量分析。

1) 分光光度法:采用ATP試劑盒,因ATP腺嘌呤堿基上存在共軛雙鍵,在紫外下有吸收峰,可用紫外分光光度法檢測ATP含量。

2) 生物發光法:利用熒光素在熒光素酶的作用下,與ATP發生反應,生成熒光素-ATP復合體,該復合體被分子氧氧化后激發熒光素發光,根據發光強弱可檢測ATP含量。

3. 層析法:利用樣品各組分之間親和力、分配系數等化學性質的差異,實現ATP與其它雜質的分離。

1) 紙層析法:是檢測核苷酸含量的常用方法之一。該方法常以異丙醇、濃氨水和水按7:1:2的混合作為展開劑。

2) 薄層層析法:該方法紙層析法原理基本相同,也是檢測核苷酸含量的常用方法之一,其常用的展開劑是正丁醇、丙酮、冰乙酸、氨水、水按7:5:3:3:2的比例混合而成。

3) 離子交換色譜法:利用樣品各組分離子交換能力或選擇系數之間的差異,實現分離,常用于工業生產中ATP含量檢測。

4) 高效液相色譜法:此方法具有強大的分離能力,操作簡單,分析時間短,靈敏度高,結果準確,是目前應用廣泛的一種ATP檢測方法


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