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大腸桿菌/大腸菌群測試片

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大腸桿菌/大腸菌群測試片

  • 類別:微生物測試片

  • 名稱:3M大腸桿菌/大腸菌群測試片6414

  • 型號:6414

  • 品牌:

    3M

  • 咨詢電話:

    010-59436228  010-62973229

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詳細介紹

Petrifilm?大腸桿菌/大腸菌群測試片含有VRB(Violet Red Bile)培養基,冷水可溶性凝膠及葡萄糖苷酶指示劑,可增強菌落計數效果。絕大多數E.coli(約97%)能產生?-葡萄糖苷酶與培養基中的指示劑反應,產生藍色沉淀環繞在大腸桿菌菌落周圍,表面覆蓋的膠膜可留住發酵乳糖的大腸菌群和大腸桿菌產生的氣體,約有95%的大腸桿菌產氣,形成藍色和藍紅色菌落并有氣泡相連接(氣泡距離菌落約有一個菌落直徑的范圍內)。

AOAC和FDA細菌分析學手冊(BAM)規定大腸菌群為格蘭氏陰性桿菌,發酵乳糖產酸產氣,大腸菌群菌落在Petrifilm?大腸桿群/大腸菌群測試片上產酸,PH指示劑使培養基變暗紅色,在紅色菌落周圍有氣泡者,為大腸菌群細菌。大腸桿菌鑒定在不同國家有所不同
一、測試大腸桿菌/大腸菌群 操作方法  

1、未開封時,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期內用完,高溫度時,凝固水可以排除,包裝物最好于室溫啟開。 2、已開封的,將封口以膠帶封緊。

3、保存再封的袋于≤25℃(≤77℉)和溫度<50%,不要冷藏已開啟的包裝袋,并于一個月內使用完。
4、制備1:10和更大稀釋的食物樣品稀釋液,稱取或吸取食物樣品,置入適宜的無菌容器內,如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內.

 5、加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的蛋白膠水(ISO方法6887) 、緩沖蛋白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水.

但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。

6、攪拌或均質樣品大腸桿菌/大腸菌群測試片

酸性樣品的稀釋液用INNaoH調PH6.5-7.5,對堿性樣品的稀釋液用IN HCL調PH6.5-7.5。

7、將測試片置于平坦表面處,揭開上層膜。 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。

9、細心將上層膜緩慢蓋下,避免有氣光泡產生,切勿使上層膜直接落下。 10、使用壓板(平面底朝下)放置在上層膜中央處。

11、輕輕的壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養面積上,切勿扭轉壓板。  12、拿起壓板,靜置至少1分鐘以使培養基凝固。

13、測試片的透明面朝上,可堆疊至20片,對有一定濕度養箱能保持最少份損失是需要的。 14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數,并可參考判讀卡計算菌落數。

15、可以分離菌落作進一步鑒定,即掀起上層膜,由培養膠上挑取單個菌落。  

二、測試大腸桿菌/大腸菌群 判讀方法  

Petrifilm ColiformTM Coliform測試片含有VRB培養劑 (Violet Red Bile),一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁(tetrazollium)指示劑,可增強菌落計數效果。絕大多數E .coli(約占97%)能產生-葡萄糖甘酸酶與培養基中的指示劑反應,產生藍色沉淀環繞在大腸桿菌菌落周圍,表面覆蓋的膠膜,可留住發酵乳糖的大腸菌群產生的氣體,約有95%的大腸桿菌產生,形成藍色或深藍上菌落并有氣泡相連接,氣泡大小約為1個菌落直徑。

AOAC和FDA細菌學分析手冊(RAM)規定大腸菌群為革蘭氏陰性桿菌,發酵乳糖產酸產氣。大腸菌群菌落在Petrifilm CC測試片上生長產酸,PH指示劑使培養基顏色變深,在紅色菌落周圍有氣泡者,為大腸菌群細菌。大腸桿菌鑒定,在不同國家可以有變更(見培養時間和溫度部分指示)。
該測試片不能單獨測定E.coli O157,像大多數其他E.conliform培養基一樣,它沒有專門指示是否有任何0157菌株的存在.

AOAC確認的方法:

E.coli=49(藍色菌落帶有氣泡)

Total coliform=87(紅色和藍色菌落帶有氣泡) No growth=0

注意圖2到8 培養基顏色的變化,隨著E.coliform菌數增多,培養基顏色變成暗紅色或藍紫色,背景的泡(沫)為培養基現象,不是大腸桿菌或大腸菌群生長結果,見方框1.

E.coli connt=13

Total coliform count=28

Petrifilm Ec測試片菌落數適宜計數范圍是15-150,不要計算圓形培養基外的菌落,因為泡棉上已不含選擇性培養基.見圓圈! E.coli count=3

任何藍色菌落(藍色到紅藍色)表明有E.coli存在,正面照明增強形成藍色沉淀菌落的測定,圓圈1示為背面光照的紅藍菌落,圓圈2示為同一菌落的正面光照藍色沉淀更明顯些.

E.coli count=17

Estimated total coliform count =150

測試片面積約為20cm2,當菌落數超過150 個,為了估計菌落數可選擇其中一個或數個有代表性菌落的小方格(1cm2 )計算平均菌落數,再乘以20方可得到整個測試片上的菌落數

Actual count~106

Petrifilm EC測試片菌落無法計數時至少有下列現象之一:

1.很多小菌落

2.有許多氣泡

3.培養基的顏色變深,由紅色到藍紫色

Actual count~108

高數量的大腸桿菌可以引起長生區變成藍紫色.

Presumptive E.couli count~8

Estimated total coliform count~108

當大腸菌群數>108 時,一些大腸桿菌菌株可能產生少量氣體和不明確的藍色菌落.所有不帶氣泡的藍色菌落和(或)藍色環帶,推定為大腸桿菌需計數,如有必要需挑取不帶氣泡的藍色菌落,進行確認試驗.

Actual count~108

當有大量的非大腸菌群細菌如假單胞菌屬細菌存在時,petrifilm EC 測試片培養基顏色呈黃色.

Total coliform count=3

食物顆粒為不規則形狀,且不帶氣泡.

Total coliform count=78

氣泡可有不同形狀,氣泡可使菌落撐散,使菌落輪廓似氣泡,見圓圈1和2.

人為氣泡可能是不當的操作所致,或是來自樣品內的氣體,它們成不規則形狀,且不與菌落相連接.

例如1-10示為不同形狀氣泡與菌落連接情況,所有菌落應記數。


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